Přejít na obsah
 
Mezinárodní společnost pro Parkinsonovu chorobu a poruchy pohybu

Minulé, současné a budoucí role testů amplifikace α-synukleinových semen

Datumkvěten 2024
Autoři: Omar El-Agnaf, PhD; Ilham Abdi, PhD; Nobutaka Hattori, MD, PhD, FANA; Tiago Outeiro, PhD.
Editory: Lorraine Kalia, MD, PhD; Daniela Berg, MD, PhD; Jeffery H. Kordower, PhD 


Úvod

Testy amplifikace semen (SAA), známé také jako konverze indukovaná třesením v reálném čase (RT-QuIC) nebo cyklická amplifikace s chybným skládáním proteinů (PMCA), byly původně vyvinuty pro detekci infekční formy prionového proteinu u Creutzfeldt-Jakobovy choroby (CJD) (Obrázek 1).1 S úspěšným vývojem SAA jako diagnostického testu pro CJD,2 SAA byly upraveny pro detekci α-synukleinu (α-syn) asociovaného s onemocněním. Mezi některé změny v protokolu testu patřilo snížení kyselosti pufru a teploty, přičemž jednou z nejdůležitějších změn bylo přidání kuliček během procesu třesení. α-Syn SAA poprvé ohlásily úspěch v detekci agregovaného α-syn u pacientů s demencí s Lewyho tělísky (DLB) a Parkinsonovou chorobou (PD) v roce 2016. Od té doby byl test replikován po celém světě v naději, že se zlepší citlivost a specificita pro detekci synukleopatie v různých biologických tekutinách a tkáních. V roce 2023 vědci používající modifikovaný α-syn SAA jako první ohlásili rozlišení mezi pacienty s PD a MSA, což je slibný další krok ve vývoji α-syn SAA.9 Níže uvedená diskuse se hlouběji ponoří do současného stavu aplikace α-syn s poznatky odborníků v oboru o praktických aplikacích, klíčovém vývoji a budoucích nadějích pro α-syn SAA.

Obrázek 1: Historická časová osa vývoje testu amplifikace α-syn semen.

 

 

Přehled článků

Přejít na: 

 

Jak se provádějí SAA v laboratoři a co se jimi měří? Jaký biomateriál je v současnosti považován za užitečný? 

Profesor Outeiro:

α-Syn SAA se provádějí smícháním materiálu lidského původu s rekombinantně připraveným monomerním α-syn (používaným jako substrát) v 96jamkové destičce za míchání a při teplotě 37 °C. V současné době se za nejužitečnější biomateriály považují mozkomíšní mok (CSF) a krev, ale v budoucnu by se mohly ukázat užitečné i jiné biomateriály, jako jsou sliny, moč, kožní homogenáty, nosní výtěry nebo stolice.Obrázek 2). 

Dr. El-Agnaf a Dr. Abdi:

Proteinopatie zahrnují patologickou agregaci špatně složených proteinů, které mohou působit jako semena podporující špatné skládání a agregaci stejných nativních proteinů.12 V případě synukleinopatií, což je typ proteinopatie, je agregace proteinu α-syn charakteristickým znakem onemocnění. Existují tři hlavní typy synukleinopatií: Parkinsonova choroba, demence s Lewyho tělísky (DLB) a mnohočetná systémová atrofie (MSA), přičemž první dva jsou primárně neuronální synukleinopatií a druhý je primárně oligodendrogliální synukleinopatií.13

SAA jsou speciálně navrženy k detekci těchto agregátů s vysokou citlivostí a specificitou. Využívají tento mechanismus očkování smícháním malého množství biologického vzorku obsahujícího chybně složený α-syn neboli „α-syn semena“ s velkým přebytkem jejich rozpustného, ​​monomerního α-syn.14 Proces amplifikace zahrnuje cykly inkubace a míchání nebo sonikace, které podporují rychlé množení těchto semen. Tato interakce usnadňuje amplifikaci chybně složených proteinových agregátů, což umožňuje detekci velmi nízkých hladin patologických proteinů. Agregace α-syn se v průběhu času monitoruje, obvykle měřením intenzity fluorescence barviva Th-T, které se přidává a které se specificky váže na vytvořené amyloidní fibrily obsahující „agregáty“ struktur β-skládaného listu. Zvýšení fluorescence v průběhu času svědčí o tvorbě agregátů α-syn. Kinetika reakce, která se odráží v růstové křivce intenzity fluorescence, může poskytnout informace o očkovací schopnosti chybně složených proteinů přítomných v původním biologickém vzorku. 3,15 

Práce v oblasti SAA prováděná u synukleinopatií, zejména u Parkinsonovy choroby (PD), v posledním desetiletí značně pokročila s vývojem SAA pro různé biomateriály.5,16 Nejčastěji používaným a informativním biomateriálem je mozkomíšní mok (CSF) kvůli jeho těsnému kontaktu s mozkem.17 Zahrnutí různých biologických tekutin a tkání do SAA bylo v nedávných studiích významným zaměřením, přičemž mnoho z nich rozšířilo rozsah i na čichovou sliznici a kožní tkáně, což svědčí o slibných výsledcích, které podtrhují adaptabilitu testu a jeho potenciál pro zvýšení diagnostické přesnosti a pohodlí.18,19 Novější práce se zabývaly použitím SAA začleněním kroku imunoprecipitace, který nejprve izoluje chybně složený α-syn z krve a poté jej aplikuje na SAA.9 

Dr. Hattori:

Používá se pro včasnou diagnostiku Parkinsonovy choroby a diferenciální diagnostiku. Nejužitečnější je zaměřeno na obecné testování a my věříme, že je důležité měřit ho v krvi. SAA konečně „položila základy biologické diagnostiky Parkinsonovy choroby“ a umožnila detekci onemocnění ještě předtím, než jsou zjištěny jakékoli klinické nebo fyzické změny. 9,21 Odběr mozkomíšního moku nebo kožní biopsie je však náročnější než konvenční testovací metody a pro rozšíření používání α-syn SAA jako vodítka pro detekci Parkinsonovy choroby může být nezbytný vývoj krevních testů a dalších méně náročných metod. 

Obrázek 2: Schéma testu amplifikace α-syn semen. Vytvořeno pomocí Biorender.com.

 

Jaká je současná role SAA v klinické praxi? Jak by měly být aplikovány u lidí s RBD, lidí s prokázanou Parkinsonovou chorobou a lidí s diagnózou parkinsonismem?

Dr. El-Agnaf a Dr. Abdi:

SAA se staly důležitými nástroji v klinickém výzkumu Parkinsonovy choroby a souvisejících poruch. Přestože SAA vykazují velký potenciál ve výzkumném prostředí, dosud nezískaly schválení pro klinické diagnostické použití. Významným pokrokem v této oblasti je však komerční dostupnost testu SYNTap® Biomarker Test ve Spojených státech. Tento test, vyvinutý společností Amprion, průkopníkem v technologii SAA, představuje podstatný krok vpřed v včasné detekci Parkinsonovy choroby a souvisejících poruch. Ačkoli není všeobecně schválen pro klinickou diagnostiku, některé kliniky, jako je Mayo Clinic, začaly test SYNTap začleňovat jako doplňkový nástroj do svých diagnostických procesů.20 Toto využití zdůrazňuje rostoucí uznání potenciálu SAA pro zlepšení klinického porozumění a péče o pacienty s neurodegenerativními onemocněními.

Studie iniciativy Parkinsonovy progrese (PPMI), která byla provedena Siderowfem a kol., vyniká jako dosud největší analýza využívající SAA a představuje významný krok v našem chápání její diagnostické účinnosti. Studie, do které bylo zařazeno 1123 účastníků, prokázala senzitivitu 87.7 % a specificitu 96.3 % pro Parkinsonovu chorobu a zdůraznila její roli v pochopení molekulární heterogenity onemocnění a identifikaci jedinců s prodromálním stavem.21

SAA by mohly být obzvláště cenné pro včasnou detekci agregátů α-syn u jedinců s rizikem rozvoje synukleinopatií, jako jsou například osoby s poruchou chování ve spánku REM (RBD) nebo hyposmií, jak dokazuje několik studií.21-24 Včasná identifikace těchto agregátů by mohla pomoci stratifikovat úrovně rizika rozvoje Parkinsonovy choroby (PD) nebo souvisejících poruch, a tím usnadnit důkladnější sledování a strategie včasné intervence. Studie PPMI zdůraznila schopnost SAA odlišit PD od zdravých kontrol a dále upřesnit diagnózu u osob s příznaky parkinsonismu, včetně osob s genetickými variantami spojenými s PD i bez nich. SAA má také schopnost rozlišovat mezi PD, DLB a MSA od parkinsonismu bez synukleinopatií, jako je progresivní supranukleární obrna (PSP) a kortikobazální degenerace (CBD).25 To napomáhá přesné diagnóze a vhodné léčbě těchto stavů. Pro přesnou diferenciální diagnózu a pochopení základní patologie onemocnění je nezbytný další výzkum a klinická validace v longitudinálnějších a rozmanitějších kohortách neurodegenerativních poruch. To by umožnilo integraci SAA do běžné klinické praxe a poskytlo by kritické vodítko pro rozhodnutí o léčbě.

Profesor Outeiro:

SAA jsou cenné pro určení přítomnosti schopnosti seedlingu u jedinců. Podle nedávných údajů se zdá, že jedinci s RBD již vykazují pozitivní signál SAA, i když nevykazují klinické znaky motorické fáze Parkinsonovy choroby. SAA mohou být velmi užitečné pro klasifikaci jedinců podle jejich α-syn statusu.

Dr. Hattori:

Pokud jde o pacienty s RBD, panuje shoda, že představují rizikovou skupinu pro synukleinopatii. Proto je důležité ověřit, jak brzy po pozitivním výsledku dojde k fenokonverzi, a to pomocí SAA v kombinaci s imunoprecipitací. Jakmile bude toto ověřeno, bude stanoveno načasování včasné intervence. Také se domníváme, že u pacientů s rozvinutou Parkinsonovou chorobou bude možné určit vztah mezi výsledky SAA a rychlostí progrese klinických symptomů. Jako validovaný test může rozlišit parkinsonismus, který není synukleinopatií. Dále budou realizovány klinické studie zaměřené pouze na synukleinopatii a bude realizována přesnější medicína.

DŮLEŽITÉ UPOZORNĚNÍ: SAA se v současné době používají v klinickém výzkumu a dosud nebyly ověřeny jako diagnostický nástroj pro prodromální PD. Další informace o etických výzvách používání SAA v klinické praxi naleznete v těchto zdrojích. 

Názory pacientů na etické problémy včasné detekce Parkinsonovy choroby. Schaeffer E, Rogge A, Nieding K, Helmker V, Letsch C, Hauptmann B, Berg D. Neurology. 2020. května 12;94(19):e2037-e2044. doi: 10.1212/WNL.0000000000009400.  

Zveřejnění rizik u prodromální Parkinsonovy choroby. Schaeffer E, Toedt I, Köhler S, Rogge A, Berg D.Mov Disord. prosinec 2021;36(12):2833-2839. doi: 10.1002/mds.28723. 

 

Jaké jsou nejslibnější možnosti vývoje této metodologie v budoucnu? Co je nezbytné k dosažení tohoto pokroku?

Dr. Hattori:

Diferenciace v rámci synukleinopatie je nyní možná. Věříme, že je zásadní zavést pokud možno přímočařejší testovací metodu. Vzhledem k tomu, že pro každou synukleinopatii existují specifické synukleinové zárodky, můžeme říci, že bude k dispozici produkce synukleinových zárodečných protilátek specifických pro dané onemocnění, což povede k vývoji terapií specifických protilátek. 

Dr. El-Agnaf a Dr. Abdi:

Výhody SAA jsou četné. Poskytují vyšší citlivost ve srovnání s jinými diagnostickými metodami a dokáží detekovat chybně složené proteiny v raných stádiích onemocnění, což potenciálně napomáhá včasnější diagnóze a intervenci.19,26 Cennou výhodu představuje také použitelnost této techniky s různými biologickými vzorky.18,19,27 Navzdory svému potenciálu však SAA není bez omezení. SAA se primárně využívá kvalitativním způsobem k detekci přítomnosti chybně složených agregátů α-syn, což generuje binární výsledky, ať už pozitivní nebo negativní na α-syn semena. Kvantifikace α-syn semen v biologických vzorcích by poskytla cenné a přesné poznatky pro diagnostiku a monitorování synukleinopatií. Ve snaze poskytnout přímější metodu kvantifikace α-syn semen naše skupina nedávno zavedla nový přístup kombinující SAA a imunotest specifický pro agregáty, který poskytuje měřitelný výsledek testu, který ukazuje úspěšnou přímou kvantifikaci naočkovaných α-syn ve vzorcích mozkomíšního moku.28 Ačkoli tento přístup robustně kvantifikoval produkty SAA z PD a DLB s vysokou specificitou a citlivostí, metodologický proces jako celek je složitý kvůli provádění dvou samostatných testů pro generování konečných výsledků. Vývoj zjednodušenějšího přístupu s využitím stejného konceptu by byl velmi cenný.  

Myšlenku začlenění imunotestu s SAA dále prozkoumala naše vlastní skupina i další. V naší práci jsme přepracovali přístup k použití agregátně specifického imunotestu vedle SAA vývojem jediného testu, který účinně amplifikuje α-syn semena a zároveň je kvantifikuje (rukopis odeslán k publikaci). Existují také různé diagnostické testy, nedávno vyvinuté výzkumníky z Brigham and Women's Hospital a Wyss Institute for Biologically Inspired Engineering na Harvardově univerzitě, označované jako testy digitální amplifikace semen (dSAA), které fungují na principu izolace jednotlivých agregátů ⍺-synukleinu v upravených mikrokompartmentech a jejich růstu do větších fluorescenčních agregátů, které se stanou snadno detekovatelnými a kvantifikovatelnými.22 

Toto úsilí zaměřené na zdokonalení SAA tak, aby se nejednalo pouze o kvalitativní, ale i kvantitativní nástroje, schopné přesně měřit množství proteinových agregátů specifických pro dané onemocnění, představuje slibný vývoj, který by měl být dále podporován. Úspěšné validace tohoto vývoje ve větším měřítku by mohla znamenat významný milník v jeho integraci do klinické praxe a klinických studií, které by dosáhly včasné a přesné diagnózy, a v konečném důsledku zlepšily výsledky léčby pacientů. 

Profesor Outeiro:

Zvýšení citlivosti testu, kvantitativní využití SAA a adaptace SAA na dostupnější lidské biomateriály by byly důležitými kroky. K dosažení tohoto cíle potřebujeme další výzkum k identifikaci podmínek testu a substrátů, které test vylepší.   

 

Jak si představujete aplikace SAA v budoucí klinické praxi a klinických studiích? 

Profesor Outeiro:

Představuji si, že status SAA bude klíčový pro klasifikaci jedinců pro klinické studie a také možná jako ukazatel zapojení cílové skupiny. 

Dr. Hattori:

Můžeme říci, že to lze nejprve aplikovat v precizní medicíně. Identifikace pacientů s vyšším rizikem vzniku onemocnění je možná také prostřednictvím fyzikálního vyšetření rizikové skupiny. V důsledku toho to bude užitečné pro preventivní medicínu. 

Dr. El-Agnaf a Dr. Abdi:

Po vývoji a validaci kvantitativní SAA mohou její potenciální aplikace vést k efektivnějším klinickým studiím a vývoji účinnějších a personalizovanějších léčebných strategií.    

SAA by mohla umožnit detekci PD, DLB a MSA před nástupem klinických příznaků, což by umožnilo intervence ve fázích, kdy je pravděpodobnější, že terapie budou účinné. Tato včasná diagnostická schopnost by nejen transformovala strategie péče o pacienty, ale také zpřesnila kritéria výběru pacientů pro klinické studie, čímž by se zajistilo, že účastníci budou přesně diagnostikováni a ve správné fázi progrese onemocnění, aby potenciální léčba měla maximální dopad. Kromě toho by kvantifikací proteinových agregátů specifických pro onemocnění mohly SAA sloužit jako biomarkery pro sledování progrese onemocnění a reakce na terapii, a nabídnout tak dynamický nástroj pro sledování zdraví pacientů v čase. V klinických studiích by to mohlo dramaticky zlepšit hodnocení terapeutické účinnosti a poskytnout jasné a kvantifikovatelné koncové body, které odrážejí změny v základní patologii onemocnění.

 

Reference

  1. Wilham, JM, Orrú, CD, Bessen, RA, Atarashi, R., Sano, K., Race, B., Meade-White, KD, Taubner, LM, Timmes, A., & Caughey, B. (2010). Rychlá kvantifikace aktivity prionového inokulace s citlivostí srovnatelnou s biologickými testy. PLoS pathogens, 6(12), e1001217. https://doi.org/10.1371/journal.ppat.1001217 

  1. Atarashi, R., Satoh, K., Sano, K., Fuse, T., Yamaguchi, N., Ishibashi, D., Matsubara, T., Nakagaki, T., Yamanaka, H., Shirabe, S., Yamada, M., Mizusawa, H., Kitamoto, G., T., McGlad, A. Nishida, N. (2011). Ultracitlivá detekce lidských prionů v mozkomíšním moku pomocí konverze vyvolané třesením v reálném čase. Přírodní lékařství, 17(2), 175–178. https://doi.org/10.1038/nm.2294 

  1. Fairfoul, G., McGuire, LI, Pal, S., Ironside, JW, Neumann, J., Christie, S., Joachim, C., Esiri, M., Evetts, SG, Rolinski, M., Baig, F., Ruffmann, C., Wade-Martins, R., Hu, MT, Parkkinen, L., & Green, AJ (2016). Alfa-synuklein RT-QuIC v mozkomíšním moku pacientů s alfa-synukleinopatiemi. Annals of clinical and translational neurology, 3(10), 812–818. https://doi.org/10.1002/acn3.338 

  1. Bongianni, M., Ladogana, A., Capaldi, S., Klotz, S., Baiardi, S., Cagnin, A., Perra, D., Fiorini, M., Poleggi, A., Legname, G., Cattaruzza, T., Janes, F., Tabaton, M., MonG, Ghetti, G., G., G., G. Pocchiari, M., & Zanusso, G. (2019). Test α-Synuclein RT-QuIC v mozkomíšním moku pacientů s demencí s Lewyho tělísky. Annals of Clinical and Translační neurologie, 6(10), 2120–2126. https://doi.org/10.1002/acn3.50897 

  1. Rossi, M., Candelise, N., Baiardi, S., Capellari, S., Giannini, G., Orrù, CD, Antelmi, E., Mammana, A., Hughson, AG, Calandra-Buonaura, G., Ladogana, A., Plazzi, G., Cortelli, P., P., Caughey, B.). Ultrasenzitivní RT-QuIC test s vysokou citlivostí a specificitou pro synukleinopatie spojené s Lewyho tělísky. Acta neuropathologica, 2020(140), 1–49. https://doi.org/10.1007/s00401-020-02160-8 

  1. Brockmann, K., Quadalti, C., Lerche, S., Rossi, M., Wurster, I., Baiardi, S., Roeben, B., Mammana, A., Zimmermann, M., Hauser, AK, Deuschle, C., Schulte, C., Waniek, K., Lachmann, I., Sjödin, S., Brinkmalm, A., Blennow, K., Zetterberg, H., Gasser, T., & Parchi, P. (2021). Souvislost mezi aktivitou očkování alfa-synukleinem v mozkomíšním moku a genetickým stavem u Parkinsonovy choroby a demence s Lewyho tělísky. Acta neuropathologica communications, 9(1), 175. https://doi.org/10.1186/s40478-021-01276-6 

  1. Poggiolini, I., Gupta, V., Lawton, M., Lee, S., El-Turabi, A., Querejeta-Coma, A., Trenkwalder, C., Sixel-Döring, F., Foubert-Samier, A., Pavy-Le Traon, A., Plazzi, G., J. Montplaisgno, J. Montplaisgno. Postuma, RB, Antelmi, E., Meissner, WG, Mollenhauer, B., Ben-Shlomo, Y., Hu, MT, … Parkkinen, L. (2022). Diagnostická hodnota kvantifikace semen alfa-synukleinu mozkomíšního moku u synukleinopatií. Mozek: časopis neurologie, 145(2), 584–595. https://doi.org/10.1093/brain/awab431 

  1. Kluge, A., Bunk, J., Schaeffer, E., Drobny, A., Xiang, W., Knacke, H., Bub, S., Lückstädt, W., Arnold, P., Lucius, R., Berg, D., & Zunke, F. (2022). Detekce patologického α-synukleinu odvozeného z neuronů v krvi. Brain : a journal of neurology, 145(9), 3058–3071. https://doi.org/10.1093/brain/awac115 

  1. Okuzumi, A., Hatano, T., Matsumoto, G., Nojiri, S., Ueno, SI, Imamichi-Tatano, Y., Kimura, H., Kakuta, S., Kondo, A., Fukuhara, T., Y., Funayama, M., Saiki, S., Inmi Taniguchi, T Mc. D., Gérardy, JJ, Mittelbronn, M., Kruger, R., Uchiyama, Y., … Hattori, N. (2023). Propagativní α-synukleinová semena jako sérové ​​biomarkery pro synukleinopatie. Přírodní lékařství, 29(6), 1448–1455. https://doi.org/10.1038/s41591-023-02358-9 

  1. Simuni, T., Chahine, LM, Poston, K., Brumm, M., Buracchio, T., Campbell, M., Chowdhury, S., Coffey, C., Concha-Marambio, L., Dam, T., DiBiaso, P., Foroud, T., Frasier, M., Gochanour, C., Jennings, D., Kieburtz, K., Kopil, CM, Merchant, K., Mollenhauer, B., Montine, T., … Marek, K. (2024). Biologická definice neuronálního α-synukleinového onemocnění: směrem k integrovanému systému stagingu pro výzkum. The Lancet. Neurology, 23(2), 178–190. https://doi.org/10.1016/S1474-4422(23)00405-2 

  1. Höglinger, GU, Adler, CH, Berg, D., Klein, C., Outeiro, TF, Poewe, W., Postuma, R., Stoessl, AJ a Lang, AE (2024). Biologická klasifikace Parkinsonovy choroby: diagnostická kritéria výzkumu SynNeurGe. The Lancet. Neurology, 23(2), 191–204. https://doi.org/10.1016/S1474-4422(23)00404-0 

  1. Bayer TA. Proteinopatie, klíčový koncept pro pochopení a v konečném důsledku i léčbu degenerativních poruch? Eur Neuropsychopharmacol [Internet]. 2015. května 1 [citováno 2024. února 18];25(5):713–24. Dostupné z: https://pubmed.ncbi.nlm.nih.gov/23642796/ 

  1. McCann H, Stevens CH, Cartwright H, Halliday GM. Fenotypy α-synukleinopatie. Parkinsonism Relat Disord. 2014. ledna 1;20(PŘÍLOHA 1):S62–7. 

  1. Concha-Marambio L, Pritzkow S, Shahnawaz M, Farris CM, Soto C. Test amplifikace semen pro detekci patologických agregátů alfa-synukleinu v mozkomíšním moku. Nature Protocols 2023 18:4 [Internet]. 2023. ledna 18 [citováno 2023. listopadu 12];18(4):1179–96. Dostupné z: https://www.nature.com/articles/s41596-022-00787-3 

  1. Shahnawaz M, Tokuda T, Waraga M, Mendez N, Ishii R, Trenkwalder C a kol. Vývoj biochemické diagnózy Parkinsonovy choroby detekcí chybně složených agregátů α-synukleinu v mozkomíšním moku. JAMA Neurol [Internet]. 2017. února 1 [citováno 2023. září 24];74(2):163–72. Dostupné z: https://jamanetwork.com/journals/jamaneurology/fullarticle/2588684 

  1. Shahnawaz M, Mukherjee A, Pritzkow S, Mendez N, Rabadia P, Liu X a kol. Rozlišování kmenů α-synukleinu u Parkinsonovy choroby a mnohočetné systémové atrofie. Nature [Internet]. 2020. února 13 [citováno 2023. listopadu 23];578(7794):273–7. Dostupné z: https://pubmed.ncbi.nlm.nih.gov/32025029/ 

  1. El-Agnaf OMA, Salem SA, Paleologou KE, Cooper LJ, Fullwood NJ, Gibson MJ a kol. α-Synuklein zapojený do Parkinsonovy choroby je přítomen v extracelulárních biologických tekutinách, včetně lidské plazmy. The FASEB Journal [Internet]. 2003. října 1 [citováno 2024. února 18];17(13):1–16. Dostupné z: https://onlinelibrary.wiley.com/doi/full/10.1096/fj.03-0098fje 

  1. Kuzkina A, Bargar C, Schmitt D, Rößle J, Wang W, Schubert AL a kol. Diagnostická hodnota kožní RT-QuIC u Parkinsonovy choroby: studie provedená ve dvou laboratořích. npj Parkinson's Disease 2021 7:1 [Internet]. 2021. listopadu 15 [citováno 2023. listopadu 22];7(1):1–11. Dostupné z: https://www.nature.com/articles/s41531-021-00242-2 

  1. De Luca CMG, Elia AE, Portaleone SM, Cazzaniga FA, Rossi M, Bistaffa E a kol. Účinná aktivita RT-QuIC pro α-synuklein ve vzorcích čichové sliznice pacientů s Parkinsonovou chorobou a mnohočetnou systémovou atrofií. Transl Neurodegener [Internet]. 2019. srpna 8 [citováno 2023. listopadu 22];8(1):1–14. Dostupné z: https://translationalneurodegeneration.biomedcentral.com/articles/10.1186/s40035-019-0164-x 

  1. Mayo Clinic. Parkinsonův test (test amplifikace α-synucleinových semen) - Mayo Clinic [Internet]. 2023 [citováno 2024. února 18]. Dostupné z: https://www.mayoclinic.org/tests-procedures/parkinsons-testing-alpha-synuclein-seed-amplification/about/pac-20556191 

  1. Siderowf A, Concha-Marambio L, Lafontant DE, Farris CM, Ma Y, Urenia PA, Nguyen H, Alcalay RN, Chahine LM, Foroud T, Galasko D, Kieburtz K, Merchant K, Mollenhauer B, Poston KL, Seibyl J, Simuni T, Tanner CM, Weintraub D, Videnovic A, Choi SH, Kurth R, Caspell-Garcia C, Coffey CS, Frasier M, Oliveira LMA, Hutten SJ, Sherer T, Marek K, Soto C; Iniciativa pro markery progrese Parkinsonovy choroby. Hodnocení heterogenity mezi účastníky kohorty Iniciativy pro markery progrese Parkinsonovy choroby s využitím amplifikace α-synukleinových semen: průřezová studie. Lancet Neurol. 2023 květen;22(5):407-417. doi: 10.1016/S1474-4422(23)00109-6. PMID: 37059509; PMCID: PMC10627170. 

  1. Gilboa T, Swank Z, Thakur R, Gould RA, Ooi KH, Norman M a kol. Směrem ke kvantifikaci agregátů α-synukleinu pomocí testů digitální amplifikace semen. Proc Natl Acad Sci USA [Internet]. 2024. ledna 16 [citováno 2024. února 18];121(3). Dostupné z: https://pubmed.ncbi.nlm.nih.gov/38194461/ 

  1. Postuma RB. Prodromální Parkinsonova choroba – Použití poruchy chování v REM spánku jako okna. Parkinsonism Relat Disord. 2014. ledna 1;20(PŘÍLOHA 1):S1–4. 

  1. Concha-Marambio L, Weber S, Farris CM, Dakna M, Lang E, Wicke T a kol. Přesná detekce α-synukleinových semen v mozkomíšním moku z izolované poruchy spánkového chování s rychlým pohybem očí a pacientů s Parkinsonovou chorobou v kohortě DeNovo Parkinson (DeNoPa). Mov Disord [Internet]. 2023. dubna 1 [citováno 2024. února 18];38(4):567–78. Dostupné z: https://pubmed.ncbi.nlm.nih.gov/36781413/ 

  1. Fernandes Gomes B, Farris CM, Ma Y, Concha-Marambio L, Lebovitz R, Nellgård B a kol. Test amplifikace α-synukleinových semen jako diagnostický nástroj pro parkinsonovské poruchy. Parkinsonism Relat Disord [Internet]. 2023. prosince 1 [citováno 2024. února 19];117. Dostupné z: https://pubmed.ncbi.nlm.nih.gov/37591709/ 

  1. Iranzo A, Fairfoul G, Ayudhaya ACN, Serradell M, Gelpi E, Vilaseca I a kol. Detekce α-synukleinu v mozkomíšním moku pomocí RT-QuIC u pacientů s izolovanou poruchou spánkového chování s rychlými pohyby očí: longitudinální observační studie. Lancet Neurol [Internet]. 2021. března 1 [citováno 2023. září 24];20(3):203–12. Dostupné z: https://pubmed.ncbi.nlm.nih.gov/33609478/ 

  1. Manne S, Kondru N, Jin H, Anantharam V, Huang X, Kanthasamy A a kol. Konverze α-synukleinu v reálném čase vyvolaná třesem v podčelistních žlázách pacientů s Parkinsonovou chorobou. Mov Disord [Internet]. 2020. února 1 [citováno 2023. listopadu 22];35(2):268–78. Dostupné z: https://pubmed.ncbi.nlm.nih.gov/31758740/ 

  1. Majbour N, Aasly J, Abdi I, Ghanem S, Erskine D, Van De Berg W a kol. Agregáty α-synukleinů asociované s onemocněním jako biomarkery klinického stadia Parkinsonovy choroby. Neurology [Internet]. 2022. listopadu 22 [citováno 2023. června 11];99(21):E2417–27. Dostupné z: https://pubmed.ncbi.nlm.nih.gov/36096686/